摘要：采用電子顯微鏡觀察和細胞培養等技術,從湖北黃陂某養殖場患病大口黑鱸(Micropterus salmoides)體內發現并分離到一株蛙病毒?；疾〈罂诤邝|的臨床癥狀主要表現為體表出血、潰瘍,肝臟發白。將病魚內臟組織勻漿超微濾液接種鱖腦細胞系(mandarin fish brain,MFB)細胞能產生典型細胞病變效應(cytopathic effect,CPE),病毒滴度達到108.36±0.15 TCID50/m L。細胞培養病毒的超薄切片電鏡觀察結果顯示,細胞質中存在大量直徑約為150 nm左右的正六邊形病毒粒子,呈晶格排列。細胞培養病毒的人工感染大口黑鱸試驗結果顯示,7 d內試驗魚死亡率高達100%,其臨床癥狀與自然發病魚相似。采用大口黑鱸病毒(largemouth bass virus,LMBV)的特異性PCR檢測方法對患病鱸組織樣品和細胞培養病毒樣品進行檢測,均能擴增出241 bp的單一目的條帶。進一步根據Gen Bank中LMBV主衣殼蛋白(major capsid protein,MCP)基因序列設計特異性引物,均能從上述樣品中擴增出1392 bp的MCP基因開放閱讀框(open reading frame,ORF)全長。將MCP氨基酸全序列進行比對,結果顯示其與Santee-Cooper蛙病毒、孔雀魚病毒6型及大口黑鱸潰瘍綜合征病毒的MCP氨基酸序列同源性高達100%。系統進化結果顯示,與感染魚類的虹彩病毒科蛙病毒屬病毒,如鱖魚蛙病毒、Santee-Cooper蛙病毒、孔雀魚病毒6型和大口黑鱸潰瘍綜合征病毒等聚成一支。這些結果證明,該分離株為虹彩病毒科蛙病毒屬的成員,暫命名為大口黑鱸蛙病毒(largemouth bass ranavirus,LMBRa V)湖北株LMBRa V-HB001。病毒敏感細胞系篩選試驗結果表明,病毒LMBRa V-HB001感染鯉上皮瘤細胞(epithelioma papulosum cyprinid,EPC)、草魚性腺細胞(grass carp ovary,GCO)、大鯢肌肉細胞(giant salamander muscle,GSM)和鯽腦組織細胞(gibel carp brain,Gi CB)均能產生典型CPE,病毒滴度可達108.0 TCID50/m L以上。本研究首次在湖北省養殖大口黑鱸體內分離與鑒定了LMBRa V病毒,建立了病毒的細胞培養方法,為進一步研究該病毒的傳播、診斷和防控技術提供了重要參考。
